动物模型构建平台

胃溃疡造模小鼠

1．实验动物
雄性清洁级昆明种小鼠152只，体重24.35±1.06g，购自中科院上海实验动物中心，生产许可证号：SCXK(沪)2003-0003。

2．主要仪器
ACS-6A型计价电子秤，数字WMY-01型温度计，SQF-EA体视显微镜，3200K(色温)、250W摄像专用光源及自制光源装置，NIKONCoolpix 4500数码相机，底部划有5.0cm×4.0cm方格的实验笼用于旷场检测，DK-S22型恒温水浴箱，小鼠固定器。

3．药物与试剂
1)磷酸组织胺，5g/瓶，国药集团化学试剂有限公司生产(批号：62014032)，用时配制成8mg/ml水溶液。
2)消炎痛，25mg/片，中美合资上海辛帕斯制药有限公司生产(批号：060201)，用时溶于5％NaHCO3溶液，浓度为5mg/ml。
3)利血平注射液，1mg/支，上海医科大学红旗制药厂生产(批号：050302)。
4)无水乙醇，500ml/瓶，国药集团化学试剂有限公司生产(批号： KJ20060509)。
5)冰醋酸，500ml/瓶，国药集团化学试剂有限公司生产(批号：T2006430)。
6)0.9％生理盐水，500ml/瓶，上海华源长富药业有限公司生产(批号：06110202)。
7)碳酸氢钠，500g/瓶，上海实验试剂有限公司生产(批号：051102)。
8)乙醚，500ml/瓶，国药集团化学试剂有限公司生产(批号：CY050104)。
9)注射用青霉素钠，0.5g/80万U，上海新先锋药业有限公司生产(批号：060902)。

4．造模方法
152只小鼠，随机分为9组，即空白对照组(正常对照组)、禁食对照组、水浸拘束法组、乙酸法组、假手术对照组、磷酸组织胺组、消炎痛组、利血平组、乙醇法组。其中乙酸法组、假手术对照组因需要手术每组为20只(以免术后意外死亡使这些组别的样本减少)，其余各组为16只。以造模前一天为第0日，造模当天为第1日。除正常对照组外，其余8组于第0日上午7：00同时开始禁食不禁水至第1日上午7：00，达24h。第1日早晨7：00开始，各组按时间安排依次开始造模，至晚19：00全部造模结束，期间各组造模前仍禁食不禁水。具体如下：
1)空白(正常)对照组：正常饮水、摄食。
2)禁食对照组：正常饮水，继续禁食至晚19：00。
3)水浸拘束组：早晨7：00开始，将各小鼠置于小鼠固定器中，限制活动，头朝上立于23℃左右的恒温水浴内，水面齐剑突，至晚19：00。
4)乙酸组：早晨8：00，乙醚吸入麻醉小鼠，无菌手术开腹，暴露胃，在胃前壁浆膜面窦体交接处同一部位(避开血管)，用浸有冰醋酸，边长为5mm的正方形滤纸接触2次，每次30秒，然后还纳胃体，逐层缝合切口。
5)假手术对照组：方法同乙酸法组，滤纸浸生理盐水。乙酸及假手术组交替进行，早11：00前手术结束。
6)磷酸组织胺组：上午11：00，灌胃8mg/ml磷酸组胺溶液0.8mg/10g。
7)消炎痛组：下午13：00，皮下注射5mg/ml消炎痛NaHCO3溶液0.3mg/10g。
8)利血平组：下午13：00，皮下注射1mg/ml利血平注射液0.1mg/10g。
9)乙醇组：下午18：00，灌胃无水乙醇0.1ml/10g。
晚19：00造模结束后，所有组别动物各随机一分为二，一半处死，另一半恢复正常饮水摄食，清洁级条件下常规饲养，观察其自然恢复及四诊表现，至第8日全部处死。其中乙酸及假手术组对存活的一半动物，后肢肌注青霉素钠40万U/kg，连续3d。

5．指标检测
(1)四诊指标检测
检测体重、摄食量、饮水量、旷场水平跨格(跨格数)和垂直站立(前肢离地站立数)、腋温、爪、尾、舌显微拍照及图像处理，检测自然状态下心电图，以及一般情况观察如动物恢复及死亡情况等。第0日、2日、5日、8日各检测1次，共4次。
(2)胃整体称重
从幽门和贲门部截取造模第1日、8日整个胃，入bouin液固定约12h左右，用双面刀片沿胃大弯剖一开口，用滴管取bouin液冲洗胃内壁，继续固定。固定至24h后，先入70％乙醇24h，再入50％乙醇24h，最后入30％乙醇24h后取出称重。
(3)胃前内壁黏膜肉眼观察
上法胃整体称重后，分离前后壁，观察前壁内侧面。
(4)病理组织学
取近胃窦近幽门胃体前壁0.5×1.0cm组织条制作病理切片，兼顾病变及与其交界正常胃壁，常规HE染色，光镜下观察。