药效学实验中心

药品抗氧化功能 动物实验评价方法

1 动物实验项目

1.1 老年动物

选取10月龄以上大鼠或8月龄以上小鼠，按血中MDA水平分组，随机分为1个溶剂对照组和3个供试品剂量组。三个剂量组给予不同浓度的供试品，对照组给予等体积的溶剂，每天一次，连续30天。实验结束时处死动物，测定脂质氧化产物含量、蛋白质羰基含量、还原型谷胱甘肽含量和抗氧化酶活性。

1.2 D-半乳糖氧化损伤模型

1.2.1 原理：D-半乳糖供给过多导致活性氧的超常产生，打破了遗传模型控制的活性氧产生和消除的平衡。引起过氧化。

1.2.2 造模方法：选用25-30g健康成年小鼠，除空白对照组外，其余动物在颈后侧皮下或腹腔注射D-半乳糖40mg-1.2g/kg BW制作模型，注射剂量为0.1mL/10g，每日1次，连续造模6周。取血测定MDA，并根据MDA水平分组。随机分为1个模型对照组和3个供试品剂量组。 3个剂量组口服不同浓度的供试品，模型对照组给予等体积溶剂。在给予供试样品的同时，模型对照组和各剂量组分别在颈后皮下或腹腔注射相同剂量的D-半乳糖。实验结束时处死动物，测定脂质氧化产物含量、蛋白质羰基含量、还原型谷胱甘肽含量和抗氧化酶活性。

1.3 乙醇氧化损伤模型

1.3.1原理：大量摄入乙醇，激活氧分子产生自由基，导致组织细胞过氧化，体内还原型谷胱甘肽耗竭。

1.3.2 建模方法：选取健康成年小鼠25-30g（大鼠180-220g），随机分为4组，1个模型对照组，3个供试品剂量组，必要时可增设空白对照组。 3个剂量组给予不同浓度的供试品，模型对照组给予等体积溶剂，灌胃给药30天。模型组、对照组及3个剂量组末次灌胃后禁食进食16小时（过夜）后，50%乙醇12ml/kgBW灌胃1次，6小时后取标本（空白对照组不处理，标本不让进食），测定血清或肝组织中脂质氧化产物和蛋白质的含量。羰基含量、还原谷胱甘肽含量、抗氧化酶活性。

2 测试原理

2.1 动物实验和人体食品试验所列指标为强制性项目。

2.2 脂质氧化产物指标中的丙二醛和血清8-表氢异前列腺素可选用指标测定，动物实验中的抗氧化酶指标为超氧化物歧化酶和谷胱甘肽。选择其中一种氧化酶用于指标测定。

2.3 选择氧化损伤模型动物和老年动物中的一种进行生化指标测定。

3 动物试验结果的判断

如果化学产品、蛋白质氧化产物、抗氧化酶、抗氧化物质四项指标中有三项为阳性，则可判定供试品抗氧化功能动物试验结果为阳性。