药效学实验中心

缓解体力疲劳的功能评价方法

1 测试项目

1.1 负重游泳测试

SPF级NIH小鼠，雌性，50只，隔离3天，随机分为阴性对照组、阳性药物对照组、低、中、高剂量组供试品，10只/组。对照组给予蒸馏水，阳性组给予阳性药物，各药物组给予相应剂量药物，连续给药30天。最后一次给予供试品30分钟后，将小鼠尾根部装有5%体重铅皮的小鼠放入游泳箱中游泳。水深不小于30cm，水温25±1℃。记录小鼠开始游泳至死亡的时间，即小鼠的负重游泳时间。

1.2 血清尿素氮实验

SPF级NIH小鼠，雌性，50只，隔离3天，随机分为阴性对照组、阳性药物对照组、低、中、高试验样品剂量组，10只/组。对照组给予蒸馏水，阳性组给予阳性药物，每组给予相应剂量药物，连续给药30天。最后一次供试品给药后30分钟，在30℃的水中自由游泳90分钟，休息60分钟，然后采血。置于4℃冰箱约3小时，凝血后2000prn/min离心15分钟，取血清，用全自动生化分析仪测定血尿素氮和磷酸肌酸激酶（CK）水平。

1.3 肝糖原实验：

SPF级NIH小鼠，雌性，50只，隔离3天，随机分为阴性对照组、阳性药物对照组、低、中、高试验样品剂量组，10只/组。对照组给予蒸馏水，阳性组给予阳性药物，每组给予相应剂量药物，连续给药30天。最后一次供试品给药后30分钟处死动物，用生理盐水冲洗肝脏并用滤纸吸干，准确称取肝脏100mg，按照肝糖原含量测定糖原试剂的要求。

1.4 血乳酸实验

SPF级SD大鼠，雄性，50只，隔离3天，随机分为阴性对照组、阳性药物对照组、低、中、高剂量组供试品，10只/组。对照组给予蒸馏水，性别组给予阳性药物，每组给予相应剂量的药物，连续给药30天。

(1)最后一次检测后30分钟采血，然后在30℃的水中自由游泳10分钟，然后停止，再采血。休息20分钟后，采血。用乳酸计测定小鼠游泳前、游泳10 min后和休息20 min后的血乳酸值。

血乳酸曲线下面积=1/2（游泳前血乳酸值+游泳后0分钟血乳酸值）×10+1/2（游泳后0分钟血乳酸值+游泳时血乳酸值）游泳后20分钟值）×20

(2)取肝脏冷冻保存，检测肝脏中MDA、SOD和谷胱甘肽过氧化物酶的含量。

二、实验原理

2.1 动物实验所列指标为强制性项目。

2.2 同一批试验样品在实验前必须进行违禁药品检测。

2.3 运动实验与生化实验指标检测相结合。

3.结果判断

如果负重游泳试验结果为阳性，且血乳酸、血清尿素、肝糖原/肌糖原三项生化指标中任意两项为阳性，则可判定该试验样品具有缓解体力疲劳的功能。