常见问题解答

一 细胞污染的种类。

细胞培养污染一般可分为微生物污染和真核生物污染。其中微生物污染包括真菌和酵母、细菌、支原体等。真核生物通常是细胞系之间的交叉污染。

细菌、真菌或酵母的污染容易识别，可以通过培养基的颜色变化和显微镜下的观察直接判断。例如细菌污染后细胞培养基变黄，镜下有小黑点，运动规律。酵母污染后，培养基变紫，镜下透明，连成一串圆形。但是，如果是支原体污染的话，最初支原体生长缓慢，显微镜下很难看到，很难发现。

真核细胞污染是指一种细胞污染另一种细胞，主要发生在操作不当，特别是在长期研究某些细胞系时。目前，越来越多的研究人员发现了细胞间污染这一被忽视的问题。据不完全统计，约15-20%的细胞被细胞间污染。

二 细胞培养污染对实验的影响。

无论发生哪种污染，都会产生相同的结果。也就是说，必须重新做实验，浪费工作时间，增加实验成本，降低实验重复性。并且在污染细胞和未污染细胞的基础上进行试验时，可能会得到完全不同的试验结果。更严重的是，如果你研究的细胞是另一种细胞，所有的工作都可能不一样。

当前，关于细胞污染的报道越来越多。期刊《The Scientist》发表了Megan Scudellari 撰写的题为 A case of mistaken identity 的文章，文中指出现已发表的 650 多项研究中所用的乳腺癌细胞可能并不是真正的乳腺癌细胞。

三 避免细胞培养污染的方法。

1） 正确的移液工具

如果移液操作不当，分装样品可能会受到污染。因此，选择合适的细胞培养移液管和高质量的耗材是保证分装样品清洁度的保证。与实验室常用的双键吸管相比，单键吸管可以更好地减少气溶胶污染，因为单键吸管撞击吸盘时活塞不需要反弹，直接按压

 2）具有生物安全柜功能的滤芯吸头

除吸管外，使用滤芯吸头可减少气溶胶污染。首选双滤芯吸入头。它有两层过滤元件和不同的孔径，以确保超高的阻隔效率。滤芯性能符合en 1822标准（空气过滤等级），并具有HEPA E12过滤性能

 3）使用培养瓶培养细胞，尤其是带有透气盖的培养瓶。与培养皿或培养板相比，只有培养瓶口可以与外界连接，减少了外界气体和微生物与培养细胞的接触，降低了污染的可能性。带有滤膜的透气瓶盖能更有效地防止细菌、病毒和支原体的污染

 4）水浴设备应清洁保养良好

水是主要污染源之一。使用水浴设备进行细胞复苏时，必须注意防止细胞培养细菌或霉菌污染。相关设备应每周覆盖并彻底清洁。可以在水浴中添加抑菌剂，以限制细菌增殖。锥形瓶/样品管从水浴中取出后应进行有效消毒。相比之下，金属浴可以提供无污染的温度控制条件。金属浴的恒温设备比水浴的恒温设备更能有效地控制污染。

（5）二氧化碳培养箱是细胞培养的关键设备。根据英国癌症医学杂志2014年的《生物医学研究中细胞系的使用指南》，对于如何选择二氧化碳培养箱的标准有明确的建议：

    1 二氧化碳培养箱应采用防锈材料制成，如不锈钢。其他材料如纯铜盒在防止霉菌污染方面也有显著效果。

 2。内罐表面应光滑，无焊缝，便于清洁

 3。在高温灭菌前，可完全拆卸搁板和搁板框架进行清洁和准备

 4。一些培养箱内置HEPA过滤器以过滤内部空气。然而，只有通过设计没有风扇的培养箱，我们才能真正减少由于室内空气快速流动而导致污染物扩散的可能性。

英瀚斯生物，公司自建有标准的细胞培养房，配备有生物安全柜、超净工作台、三气细胞培养箱、二氧化碳细胞培养箱、荧光倒置显微镜、体视镜、酶标仪、流式细胞仪等设备。细胞组技术人员毕业于东南大学、华中科技大学等知名高校生物学相关专业，具有硕士研究生以上学历，熟练掌握细胞学相关实验，可开展多种细胞实验。